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河豚毒素5种检测方法详解,从“拼死吃”到放心吃!

2021-03-29 15:30


“春江水暖鸭先知,正是河豚欲上时。”每当春暖花开之计,河豚逆流而上,从大海游回江河, 2月到5月是河豚鱼最肥美的时节,也是河豚毒素最强的季节。

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作为“天下第一鲜”的河豚,食客中毒身亡的事件屡屡发生,河豚毒素为自然界最强毒素之一,220摄氏度以上才能分解。毒性相当于砒霜的1250倍,只需要0.48毫克就能致人死命。其毒素主要有河豚毒和河豚酸两种,属于神经毒素的一种,呕吐、神经麻痹、四肢发冷,进而心跳和呼吸停止。

我国《水产品卫生管理办法》明确规定:河豚鱼有剧毒,不得流入市场,这使河豚毒素的检测越来越为人们所重视。

河豚毒素的限量标准:检出限为0.1mg/kg,定量限为0.25mg/kg。

国标 GB5009.206—2016《水产品中河豚毒素的测定》规定了4种测定方法,今天,我们美正检测团队给大家详细分享河豚毒素常用5种检测方法及操作流程,主要适用于河豚鱼肌肉、肝脏、皮肤和性腺组织中河豚毒素的测定。

1小鼠生物法

是最原始、最直观的检测方法,通过小鼠死亡前所呈现出的典型的河豚毒素中毒症状,可迅速地将河豚毒素与其它致死性物质区分开。其原理是,根据小鼠注射试样提取液后的死亡时间,查出鼠单位,并按照小鼠体重校正单位,计算确定河豚毒素含量。此方法测得的毒力用小鼠单位来表示。

优点:小鼠法不需要特殊装置,操作简便,适用于基层检验。

缺点:计算方式复杂,重复性差、费时费力,个体差异大、重现性不好,而且需有一定规模才能客观反映实验结果。


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2液相色谱-串联质谱法

试样经提取后利用免疫亲和柱净化,利用液相色谱将混合物进行分离,对分离的组分进行质谱检测,能同时进行定性定量分析。外标法定量,本方法的检测限为1μg/kg,定量限为3μg/kg。

优点:灵敏性高,对样品的适用性广,不需要衍生化,大大简化了分析工作量。能准确的定量分析河豚毒素,分析结果具权威性。

缺点:分析时间长、分析过程复杂、检测费用高、专用仪器昂贵、对样品的纯度要求较高。


3液相色谱-荧光检测法

试样经提取后利用免疫亲和柱净化,液相色谱——柱后衍生荧光法测定,以保留时间定性,外标法定量。本方法的检测限为50μg/kg,定量限为150μg/kg。

优点:较其他方法灵敏度高,较液相色谱-串联质谱法灵敏度低,对样品的适用性广。

缺点:TTX没有荧光吸收,必须先要衍生化成具有荧光吸收的物质,需衍生装置,操作比较繁琐。


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4酶联免疫吸附法(ELISA)

试样中的河豚毒素经提取、脱脂后与一定量的固相抗原竞争结合一定量的抗体,加入酶标二抗反应,最后加入显色液,显色深浅与试样中待测河豚毒素含量呈负相关,试样中河豚毒素含量越高,显色越浅。

优点:酶联免疫吸附法快速、灵敏,不需要复杂和昂贵的仪器,可以实现大量样本的初筛工作,满足现场工作的需要。

缺点:严格来讲,此方法为半定量检测。


5胶体金法

试样经提取液提取,离心后取上清待测。其原理为待测液中的抗原与NC膜上的预划的抗原竞争结合一定量的抗体,导致CT线呈现出不同的显色水平。将待测液滴加至检测卡的加样孔中,一定时间后根据CT线的显色情况进行检测结果的判读。

优点:检测方便,耗时短,效率高,单个样本检测仅需10-15min,可以满足大量样本的初筛工作。

缺点:检测结果为定性判读,无法得到具体含量数值。


除上面常规的检测方法外,国内报道的还有分光光度计法、薄层层析法、高效毛细管区带电泳法等方法。这些方法准确度不高,操作相对复杂。国外也有柱转换液相色谱/质谱/电喷雾法、薄层层析/快原子轰击质谱法、亲水作用色谱-电喷雾质谱法、电喷雾离子化质谱法等方法的报道,这些方法所需仪器设备都昂贵,也不便于普遍推广。

目前河豚毒素的检测方法多种多样,各有优缺点,大家应根据需要选择合适的检测方法。

说到这里,美正检测用实力说话!我们具有进行河豚毒素检测能力的资质,通过了CNAS实验室认可及CMA资质认定。

美正集团在河豚毒素检测中不仅可为广大客户提供第三方检测服务还可以提供高品质的河豚毒素的标准品阳性质控样品以及前处理所需的河豚毒素免疫亲和柱等相关耗材。在快速检测方面美正集团也可提供河豚毒素ELISA检测试剂盒,为河豚生鲜的快速入市提供安全保障。

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